medycyna pracy siedlce salus

Aby zidentyfikować NE, próbki skóry analizowano metodą zymografii żelowej kazeiny. Jak pokazano na Figurze 1, kaze-niolityczne prążki w zakresie od 24 do 72 kDa były widoczne w ekstraktach ze skóry okołogniskowej / okołogałkowej u myszy, którym wstrzyknięto IgG anty-BP180 (Figura 1, ścieżka 3) oprócz pasma 24 kDa obserwowanego w ekstraktach. kontrolnych próbek skóry uzyskanych od myszy, którym wstrzyknięto PBS (Figura 1, ścieżka 1) lub normalną króliczą IgG (Figura 1, ścieżka 2). Aktywność kazeinolityczną związaną z tymi pasmami była hamowana przez PMSF (Figura 1, ścieżka 8), ogólny inhibitor proteazy serynowej, ale nie przez inhibitor metaloproteinazy, EDTA (Figura 1, ścieżka 6). Zespół 29-kDa wędrował z mysim NE (ryc. 1, pasy 4 i 7). Eksperymenty inhibicji potwierdziły aktywność jako NE, ponieważ jego aktywność mogła być całkowicie zablokowana przez naturalny inhibitor NE, a-1-PI (Figura 1, ścieżka 11) i przez syntetyczny inhibitor peptydu NE, MeOSuc-AAPV-CK (Figura 1, ścieżka 12), ale nie przez syntetyczny peptyd CG / inhibitor chymazy, Z-GLF-CK (Figura 1, ścieżka 13). Pasmo 24 kDa, które znaleziono w skórze obu myszy, którym wstrzyknięto IgG i kontrolnej myszy mBP180, zidentyfikowano jako białkoazę CG / białko podobne do chymazy, ponieważ jego aktywność może być zablokowana przez Z-GLF-CK (Figura 1). , ścieżka 13), ale nie przez MeOSuc-AAPV-CK (Figura 1, ścieżka 11). Wyniki te pokazują, że podwyższone poziomy NE są związane z tkanką zmienioną / perylacyjną w doświadczalnym BP. Rycina Zymografia żelowa celazyny z eksperymentalną skórną zmianą BP. Analizowano próbki skóry (12 .g / ścieżkę) od myszy BALB / c, którym wstrzyknięto PBS (linia 1), kontrolne królicze IgG (linia 2) lub patogenną anty-mBP180 IgG (ścieżki 3, 6, 8, 10. 13). przez żelową zymografię kazeinową. Oczyszczony ekstrakt z mysich neutrofili (1 .g / ścieżkę, ścieżki 4, 7 i 9) i oczyszczony ludzki NE (5 ng / ścieżkę, ścieżka 5) zastosowano jako wzorzec. Pasmo kazeinolityczne o masie 29 kDa, wędrujące ze standardem NE (strzałka) było całkowicie hamowane przez inhibitor proteazy serynowej, PMSF (ścieżki 8 i 9), ale nie przez inhibitor metaloproteinaz, EDTA (ścieżki 6 i 7). Ta aktywność była również blokowana przez inhibitor elastazy neutrofilowej, MeoSUC-AAPV-CK (AAPV, ścieżka 11) lub AI-PI (ścieżka 12), ale nie przez inhibitor CG / chymazy, GLF (ścieżka 13) lub DMSO (linia 10). ). mNE, mysi NE. Aby NE było istotne patologicznie, NE musiałaby zostać uwolniona z neutrofili w miejscu zapalnym skóry. Aby to ocenić, ustaliliśmy obecność NE w płynie w blistrze. Istotnie wysokie poziomy aktywności NE wykryto w płynie w blistrze myszy NE + / +, którym wstrzyknięto IgG (Figura 2a). Podobnie, CG (Figura 2a) i GB (Figura 2b) były również obecne w płynie w blistrze. Wyniki te pokazują, że NE jest uwalniane z naciekających neutrofili w miejscach uszkodzenia. Figura 2: Identyfikacja NE, GB i CG w płynie w blistrze eksperymentalnego BP. Płyny blistra (20 .l / ścieżkę) od myszy BALB / c, którym wstrzyknięto chorobotwórcze IgG (ścieżki 2 i 4) lub wypłukanie PBSa. (20 (L / ścieżka) od myszy BALB / c, którym wstrzyknięto kontrolne IgG (ścieżki i 3) analizowano z użyciem kazeiny (a) i żelatyny (b) zymografię żelową. NE, (linia 2), CG (linia 2) i GB (linia 4) były obecne w płynie w blistrze, ale nie kontrolowały próbek (ścieżki i 3). Myszy z niedoborem elastazy są odporne na patogenne działanie przeciwciał anty-BP180. Aby bezpośrednio określić, czy NE bierze udział w tworzeniu pęcherzyków podnabłonkowych w doświadczalnym BP, przeprowadzono eksperymenty transferu pasywnego na następujących 3 grupach myszy: NE. /. myszy, dobrane myszy kontrolne z miotu (NE + / +) i myszy BALB / c z kontrolą pozytywną. Myszy z tych 3 grup wstrzyknięto śródskórnie identycznymi dawkami patogennej IgG anty-BP180 (2,5 mg / g masy ciała). Zgodnie z oczekiwaniami, myszy NE + / + (n = 8) (Figura 3a, Tabela 1) i BALB / c (n = 9) wytworzyły rozległe blistry w ciągu 12 godzin po wstrzyknięciu IgG anty-BP180 (Tabela 1)
[więcej w: wirtualna kolonoskopia, quilling allegro, przepuklina przeponowa objawy ]