nawrocki okulista łódź radwańska

Po aktywacji komórek enzymy te są wydzielane do przestrzeni międzykomórkowej (22). Te i inne proteinazy, np. Aktywatory plazmin i plazminogenu, wykryto w płynie pęcherzowym BP i w miejscach skóry okołomenowej / peryferyjnej u pacjentów z BP (25. 31). Niedawno wykazaliśmy, że myszy z niedoborem GB są oporne na eksperymentalne BP (32); jednak znaczenie innych proteinaz w powstawaniu pęcherzyków i ich pochodzenia komórkowego pozostaje nierozwiązane. W tym badaniu zbadaliśmy rolę elastazy neutrofilowej (NE) w tworzeniu pęcherzy w doświadczalnym BP przy użyciu NE. /. zmutowane myszy. Metody Odczynniki. Ludzki NE, CG, inhibitor 1-proteinazy (A 1-PI), A 1-antychymotrypsyna (a 1-ACT) i mieloperoksydaza (MPO) pochodziły z Athens Research and Technology, Inc. (Ateny, Georgia, USA). Mouse GB pochodzi z Triple Point Biologics (Forest Grove, Oregon, USA). PMSF, 1,10-fenantrolinę, chymostatynę, DMSO, kazeinę, żelatynę i PMA uzyskano z Sigma Chemical Co. (St. Louis, Missouri, USA). Metoksysukcynyl-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanalid (Met-O-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA), metoksysukcynyl-Ala-Ala-Pro-Val-chlorometyloketon (MeoSuc-AAPV-CK), sukcynyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanalid (Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA) i karbobenzoksy-Gly-Leu-Phe-chlorometyloketon (Z-GLF-CK) pochodziły z firmy Enzyme Systems Products Inc. (Dublin, Kalifornia, USA). Zwierzęta laboratoryjne. Hodowane pary myszy BALB / c zakupiono w The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Maine, USA) i utrzymywano w Medical College of Wisconsin Animal Resource Centre. Mutanty NE-zerowe (NEy / a) i dopasowane kontrolne osoby z miotem (NE + / +) wytworzono jak opisano wcześniej przez homologiczną rekombinację w embrionalnych komórkach macierzystych (ES) 129Sv / J i przeniesiono do linii płciowej w 129Sv / Jx C57BL / 6J. tło (33). Nowonarodzone myszy (w wieku 24-36 godzin, o masie ciała od 1,4 do 1,6 g) stosowano do eksperymentów przenoszenia pasywnego. Przygotowanie patogennej IgG anty-BP180. Przygotowanie rekombinowanego mysiego BP180 i immunizację królików przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (17). W skrócie, fragment ektodomeny mysiego antygenu BP180 (34) wyrażono jako białko fuzyjne glutationo-S-GST (GST) przy użyciu prokariotycznego układu ekspresyjnego pGEX (Pharmacia LKB Biotech Inc., Piscataway, New Jersey, USA). Mysie białko fuzyjne BP180, oznaczone GST-mBP180ABC, oczyszczono do homogenności za pomocą chromatografii powinowactwa (35). Nowonarodzone białe króliki immunizowano oczyszczonym białkiem fuzyjnym mBP180, a frakcję IgG z surowicy (oznaczoną R621) oczyszczono jak opisano wcześniej (17). Frakcje IgG zatężono, wyjałowiono przez ultrafiltrację, a stężenia białka określono przez OD280nm (E [1%, cm] = 13,6). Miana przeciwciał anty-mBP180 zarówno w niefrakcjonowanej surowicy królika, jak iw oczyszczonej frakcji IgG badano za pomocą pośredniej immunofluorescencji (IF) z użyciem kriosekcji skóry myszy jako substratu. Preparaty przeciwciał badano także metodą immunoblottingu wobec białka fuzyjnego GST-mBP180ABC. Techniki IF i immunoblotingu zostały opisane w innym miejscu (17). Patogeniczność tych preparatów IgG zbadano w doświadczeniach z pasywnym transferem, jak opisano poniżej. Niepatogenny preparat anty-mBP180 IgG (oznaczony jako R50) zastosowano jako kontrolę (19). Indukcja eksperymentalnej BP i kliniczna ocena zwierząt. Noworodkom podawano śródskórne wstrzyknięcie jałowego roztworu kontrolnej IgG lub IgG anty-BP180 w PBS (50 .l / obj; 2,5 mg IgG / g masy ciała), jak opisano w innym miejscu (17). Skórę noworodków myszy z grup testowych i kontrolnych badano 12 lub 24 godziny po wstrzyknięciu frakcji IgG. Zakres choroby skóry oceniano następująco: (.), Brak wykrywalnej choroby skóry; 1+, łagodna rumieniowa reakcja bez śladu epidermalnego oderwania. (znak ten został wywołany delikatnym tarciem skóry myszy, która, gdy była pozytywna, wytworzyła drobne, uporczywe marszczenie się naskórka); 2+, intensywny rumień i naskórkowy znak dystrofii obejmujący 10. 50% naskórka na obszarach zlokalizowanych; i 3+, intensywny rumień z objawami franczystego oderwania naskórka obejmującymi więcej niż 50% naskórka w miejscu wstrzyknięcia. Po badaniu klinicznym zwierzęta uśmiercono i otrzymano próbki skóry i surowicy
[podobne: apteka legnica dyżur, mefedron opinie, apteka głogów dyżur ]